التخفيف في الكيمياء هو عملية تقليل تركيز مادة في المحلول. التخفيف المتسلسل هو التخفيف المتكرر للمحلول لزيادة عامل التخفيف بسرعة. يتم تنفيذ هذا الإجراء عادةً في التجارب التي تتطلب حلولاً مخففة للغاية وبدقة عالية. على سبيل المثال التجارب التي تتضمن منحنيات التركيز على مقياس لوغاريتمي أو تجارب لتحديد كثافة البكتيريا. تستخدم التخفيفات المتسلسلة على نطاق واسع في التجارب العلمية مثل الكيمياء الحيوية وعلم الأحياء الدقيقة وعلم العقاقير والفيزياء.
خطوة
طريقة 1 من 2: أداء التخفيف الأساسي
الخطوة 1. تحديد محلول المخفف المناسب
من المهم جدًا تحديد السائل الذي سيتم استخدامه للتخفيف. العديد من المحاليل قابلة للذوبان في الماء المقطر ، ولكن هذا ليس هو الحال دائمًا. إذا كنت تخفف البكتيريا أو الخلايا الأخرى ، فافعل ذلك على وسط زراعي. سيتم استخدام السائل الذي تختاره لجميع تخفيفات السلسلة.
إذا كنت في شك بشأن أي مادة مخففة يجب استخدامها ، فاطلب المساعدة أو ابحث على الإنترنت. ابحث عن أمثلة من آخرين قاموا بعمل تخفيف متسلسل مماثل
الخطوة 2. قم بإعداد عدد من أنابيب الاختبار التي تحتوي على 9 مل من المادة المخففة
تستخدم أنابيب الاختبار للتخفيفات الفارغة. أولاً ، ضع العينة غير المخففة في الأنبوب الأول ، ثم قم بإجراء التخفيفات بالتتابع مع الأنابيب التالية.
- قم بتسمية جميع الأنابيب المستخدمة قبل البدء في التخفيف حتى لا تشعر بالارتباك بمجرد تشغيل التجربة.
- سيتم تعبئة كل أنبوب بـ 10 مخففات ، بدءًا من الأنبوب الذي لم يتم تخفيف مادته. التخفيف في الأنبوب الأول هو 1:10 ، متبوعًا بـ 1: 100 في الأنبوب الثاني ، و 1: 1000 في الأنبوب الثالث ، وهكذا. حدد مقدار التخفيف الذي يجب إجراؤه مسبقًا ، حتى لا تضيع محلول المخفف.
الخطوة 3. قم بإعداد أنبوب اختبار يحتوي على 2 مل على الأقل من المحلول غير المخفف
الحد الأدنى من المحلول المطلوب تخفيفه لإجراء تخفيف السلسلة هذا هو 1 مل. إذا كنت تستخدم 1 مل فقط ، فلن يتبقى محلول غير مخفف. قم بتسمية BLM للحلول غير المخففة.
اخلطي المحلول جيدًا قبل البدء في التخفيف
الخطوة 4. نفذ التخفيف الأول
خذ 1 مل من المحلول غير المخفف من أنبوب اختبار BLM باستخدام ماصة وضعه في أنبوب اختبار مكتوب عليه 1:10 يحتوي على 9 مل من المادة المخففة ، ثم اخلطه جيدًا. يوجد الآن 1 مل من المحلول غير المخفف في 9 مل من المادة المخففة. وبالتالي ، تم تخفيف المحلول بمعامل تخفيف قدره 10.
الخطوة 5. قم بإجراء التخفيف الثاني
للتخفيف الثاني ، خذ 1 مل من المحلول من الأنبوب 1:10 ، ثم ضعه في الأنبوب 1: 100 الذي يحتوي أيضًا على 9 مل من المادة المخففة. تأكد من خلط المحلول الموجود في الأنبوب 1:10 تمامًا قبل إضافته إلى الأنبوب التالي. مرة أخرى ، تأكد من خلط التخفيف في الأنبوب 1: 100 تمامًا. تم تخفيف المحلول من الأنبوب 1:10 10 أضعاف في الأنبوب 1: 100.
الخطوة 6. استمر في هذا الإجراء لإجراء تخفيف السلسلة الأطول
يمكن تكرار هذه العملية عدة مرات حسب الضرورة للحصول على تركيز المحلول المطلوب. في التجارب التي تستخدم منحنيات التركيز ، يمكنك إجراء التخفيفات المتسلسلة لإنتاج عدد من الحلول بتخفيفات 1 ، 1:10 ، 1: 100 ، 1: 1000.
طريقة 2 من 2: حساب معامل التخفيف والتركيز النهائي
الخطوة 1. احسب نسبة التخفيف الأخير في التخفيف المتسلسل
يمكن تحديد نسبة التخفيف الكلية بضرب عامل التخفيف من كل خطوة إلى الخطوة النهائية. التوضيح الرياضي مع الصيغة در = د1 وجه ضاحك2 وجه ضاحك3 س … س د ، در هو عامل التخفيف الكلي و D هي النسبة المخففة.
- على سبيل المثال ، لنفترض أنك قمت بعمل تمييع بنسبة 1:10 4 مرات. أدخل العامل المخفف في الصيغة: در = 10 × 10 × 10 × 10 = 10000
- العامل المخفف في الأنبوب الرابع في تخفيف السلسلة هذا هو 1: 10000. تركيز المادة بعد التخفيف أقل بـ 10000 مرة مما كان عليه قبل التخفيف.
الخطوة 2. تحديد تركيز المحلول بعد التخفيف
لتحديد التركيز النهائي للمحلول بعد التخفيف المتسلسل ، يجب أن تعرف تركيزه الأولي. الصيغة هي Cنهاية = جبداية/ د ، جنهاية هو التركيز النهائي للمحلول المخفف ، جبداية هو التركيز الأولي للمحلول الأصلي ، و D هي نسبة التخفيف المحددة مسبقًا.
- على سبيل المثال: إذا بدأت بمحلول خلوي تركيزه 1،000،000 خلية لكل مل ونسبة التخفيف 1،000 ، فما هو التركيز النهائي للعينة المخففة؟
-
باستخدام الصيغة:
- جنهاية = جبداية/د
- جنهاية = 1.000.000/1.000
- جنهاية = 1000 خلية لكل مل.
الخطوة الثالثة: تأكد من أن جميع الوحدات متماثلة
عند إجراء أي عملية حسابية ، تأكد من أن الوحدات هي نفسها دائمًا في نهاية الحساب. إذا كانت الوحدة الأولية عبارة عن خلايا لكل مل ، فتأكد من بقاء الوحدات كما هي في نهاية الحساب. إذا كان التركيز الأولي هو أجزاء لكل مليون (bpd) ، فيجب أن يكون التركيز النهائي أيضًا بوحدات bpj.
